细胞划痕实验

细胞划痕实验

一、实验简介

细胞划痕（修复）法是一种简捷的测定细胞迁移运动与修复能力的方法，类似体外伤口愈合模型。在体外培养皿或平板培养的单层贴壁细胞上，用微量头或其他硬物在细胞生长的中央区域划线，去除中央的细胞，然后继续培养细胞至设定时间（采用无血清或低血清（<2%）排除细胞增殖的影响），取出培养板，观察周边细胞是否生长（修复）至中央划痕区，以此判断细胞的生长迁移能力。通常设定正常对照组与实验组，实验组中添加某些处理因素或药物、外源性基因等，通过不同分组之间的细胞对于划痕区的修复能力，判断比较各组细胞的迁移与修复能力。

二、细胞划痕实验步骤

(1) 先用marker笔在6孔板背后，用直尺比着，均匀的划横线，大约每隔0.5~1cm一道，横穿过孔。每孔至少穿过5条线。   

(2) 在孔中加入约5×105个细胞，培养细胞至汇合度达到90%以上。  

(3) 用头比着直尺，垂直于背后的横线划痕。  

(4) PBS洗细胞3次，去除划下的细胞，加入无血清培养基。

(5) 放入37℃ 5% CO2培养箱培养。按0，12，24，48h时间点取样，100倍镜下拍照。如果细胞迁移（修复）能力较强，需相应缩短观察时间间隔。

(6) 结果分析：对不同时间点不同处理分组的划痕间距进行分析。