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基因编辑细胞系原理
CRISPR/Cas9系统的原理是利用gRNA特异性识别靶序列，并引导Cas9核酸内切酶对靶序列的PAM上游进行切割，从而造成靶位点DNA双链断裂，随之利用细胞的非同源末端连接（NHEJ）或同源重（HDR）的方式对切割位点进行修复，实现DNA水平的基因敲除、敲入或点突变。
基因敲除细胞系
通过病毒法，化学转染法或电转法将gRNA和Cas9转入细胞中，根据转染方法不同进行不同时长的药筛，药筛完成后挑选单克隆培养。选择不同的克隆分别进行靶位点扩增及测序验证，筛选出移码基因敲除的阳性克隆。
常见基因敲除细胞系类型
敲除方案：
万物生物根据客户需求，结合靶基因的情况进行基因敲除方案设计。
一、小片段敲除方案
gRNA设在外显子2两端的内含子中，敲除外显子编码碱基数为非3倍数，敲除后可造成移码；
二、移码敲除方案
gRNA设在外显子上，缺失的碱基数为非3倍数，敲除后可发生移码突变；
三、大片段敲除方案
将整个基因的编码序列敲除，达到大片段敲除的效果。
服务流程
