豚鼠自身免疫性梅尼埃病模型

梅尼埃病(Ménières disease)是一种特发性内耳疾病,在1861年由法国医师Prosper Ménière首次提出。该病主要的病理改变为膜迷路积水,临床表现为反复发作的旋转性眩晕、波动性听力下降、耳鸣和耳闷胀感。本病多发生于30～50岁的中、青年人,儿童少见。男女发病无明显差别。双耳患病者约占10%～50%。目前已知的病因包括以下因素:各种感染因素(细菌、病毒等)、损伤(包括机械性损伤或声损伤)、耳硬化症、梅毒、遗传因素、过敏、肿瘤、白血病及自身免疫病等。

豚鼠自身免疫免疫性梅尼埃病模型采用同种内耳抗原免疫豚鼠,部分动物能够对同种内耳抗原产生免疫应答,导致了单侧或双侧听力受损,并出现眼震等梅尼埃病症状。 

模型制作方法:豚鼠,体重350g-400g,雌雄兼用。

抗原制备  同种内耳抗原(GPCAG)取自豚鼠新鲜期骨。处死豚鼠后立即在解剖显微镜下取出迷路组织,置放与4℃0.01mol/l PH7.2的PBS中捣碎,匀浆,2500r/min离心10min,取上清液在751紫外分光光度计测定蛋白的含量,将蛋白浓度调到1200ug/ml。制成后立即免疫动物或加1/10000NaN3低温保存。

豚鼠免疫方法  以同种内抗原400ug/0.05ml+CFA0.5ML,于豚鼠后足及背部皮下注射,第14天重复注射1次;第28天GPCAG 400ug/0.5ml+CFA0.5ml,于豚鼠背部多点皮下注射,第42天重复第28天注射1次。免疫后第9周检测动物模型是否成功。

观测指标与分析:

 (1)、白细胞移动抑制试验;

(2)、血清抗特异性内耳抗体;

(3)循环免疫复合物;

(4)、耳蜗电图测试耳蜗微音电位和AP;

(5)内耳石蜡切片;

(6)、内耳酶免疫组化学。如实验动物出现符合四个条件,即判断为动物模型成功。