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g DNA提取的目的
基因组DNA(gDNA)提取是生命科学中最普遍使用的程序之一。gDNA包含生物体的所有遗传,染色体物质,并编码生命必需的所有成分。gDNA提取的目的是将这种遗传物质与细胞的其余部分(蛋白质,RNA,细胞膜等)分开。纯化后,科学家可以研究单个基因,对整个基因组进行测序,修饰DNA片段等。
但是,所有这些下游应用都从基因组DNA纯化开始。因此,重要的是要确保您获得的是最优质的DNA。这就是为什么我们汇编了有关gDNA纯化的最佳技巧的列表。
如何从gDNA提取中获得更多
或多或少的样品
每个样品都是唯一的,并且DNA含量不同。一些样本类型(例如,肌肉组织)含有少量的DNA,而其他样本(例如,有核血液)则充满了过量的DNA。遵循上样指南是一种好习惯,因为过多的样品会导致色谱柱堵塞而影响试剂盒性能。有时少即是多!
g DNA提取的样品类型
任何gDNA提取的第一步是裂解细胞,以破坏细胞膜并释放内含物。完成裂解步骤至关重要。裂解不当会大大降低产量(因为DNA被困在细胞内)或降低纯度(因为过量的细胞碎片会渗出盐分)。为确保最佳裂解条件,请考虑您开始使用的样品类型。
细胞与生物液
- 细胞和生物体液(血液,精液,唾液,牛奶等)通常是直截了当的,需要在55°C快速消化蛋酶K。如果样品在消化后是完全均质的,那您就应该做好了!
组织
- 由于组织是3D固体基质,因此需要更强烈的裂解程序。消化组织的最快方法是切开样品(尽可能小)以增加表面积。这为蛋白酶K提供了更多的空间来分解组织的小部分。这样做将大大加快消化时间,因此您无需隔夜孵育。