微生物基因组DNA提取

       通过DNA 测序对微生物进行物种鉴定（菌种鉴定）是比传统生化鉴定更先进的鉴定方法。DNA 测序不依赖菌种本身特点，对所有菌种均可使用。比传统生化鉴定更加快速，准确。麟美生物提供的微生物物种鉴定服务包括细菌16s rDNA鉴定和真菌26s rDNA鉴定、真菌ITS和真菌18s 鉴定。

提供样品

      基因组DNA：浓度≥ 10 ng/μl，总体积≥ 20 μl，革兰氏阳性细菌由于细胞壁较厚，最好提供基因组DNA；

      带有单菌落的平板或斜面：应长有至少分离三次以上的单菌落。

交付报告

      PCR 产物照片；

      菌种鉴定NCBI 参考结果；

      测序彩色波形图；

      测序方向图；

      序列碱基图。

16S DNA测序技术服务

技术原理

16S rDNA为编码原核生物核糖体小亚基rRNA的DNA序列，具有10个保守区和9个高变区，其中保守区在细菌间差异不大，高变区具有属或种的特异性，随亲缘关系不同而存在差异。16S rDNA扩增子测序，通常是选择1-2个高变区，利用保守区设计通用引物进行PCR扩增，再对高变区进行测序分析和菌种鉴定。16S rDNA扩增子测序技术是研究环境样品中微生物群落结构组成、挖掘样品之间差异的重要手段。

16S rDNA结构示意图

16S rDNA常用引物

实验路线

   为提高数据的利用效率，扩增子通常进行混样建库，为此需要在上下游引物的5’端加6-8个碱基的barcode序列，用于区分不同的样品；PCR产物检测合格后，等质量混合到一起，构建PCR-free文库并上机测序。

技术路线

样本要求

   注：扩增子测序结果的准确性受DNA质量影响较大，所以前期样本采集的过程一定要保证快速和低温环境，提取过程也要确保DNA的完整性和提取量。

实验周期 

  样本质检合格后，22个工作日。