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这一步完全可以购买供细胞或组织使用的DNA提取试剂盒,如果实验室条件成熟,自己配试剂提取完全可以。DNA比较稳定,只要在操作中不要使用暴力,提出的基因组DNA应该是完整的。
此步重点在于DNA的纯度,即减少或避免RNA、蛋白的污染很重要。因此在提取过程中需使用蛋白酶K及RNA酶以去除两者。
使用两者的细节:
1、蛋白酶K可以使用灭菌双蒸水配制成20mg/ml;
2、RNA酶必须要配制成不含DNA酶的RNA酶,即在购买市售RNA酶后进行再处理,配制成 10mg/ml。否则可能的后果是不仅没有RNA,连DNA也被消化了。两者均于-20℃保存。
验证提取DNA的纯度的方法有二:
1、紫外分光光度计计算OD比值;
2、1%-1.5%的琼脂糖凝胶电泳。
第二种方法优于第一种方法,这种方法完全可以明确所提基因组DNA的纯度,并根据Marker的上样量估计其浓度,以用于下一步的修饰。