产品中心Cell Resources
联系我们CONTACT US
18225607483
24小时服务热线355185756@qq.com销售邮箱
产品详情
一、包被抗原
1. 用50mM 的碳酸盐包被缓冲液(pH 9.6)溶解抗原,使抗原浓度为10-20 μg/ml,加100 μl/孔到96 孔酶标板,4℃放置过夜。
2. 第二天弃去包被液后,用PBST 洗涤3 次,每孔加入150 μl 1% BSA 37℃封闭1 小时。
3. PBST 洗涤3 次后,每孔加入100 μl 不同倍比稀释度的血清,并加入对照样品,37℃孵育2 小时。
4. PBST 洗涤5 次后,加入100μl 稀释后的HRP 标记的二抗,37℃孵育1 小时。
5. PBST 洗涤5 次后,显色剂显色20 min 后,酶标仪上读取A405 吸收值。
二、包被细胞
1. 在96 孔培养板上接种细胞数为1 x 104 cells/well,37℃过夜培养。
2. 第二天用PBS 洗涤培养板2-3 次。
3. 加入125 μl/well 10% Forma lin(1:10 稀释), 室温下固定15 min。
4. 用ddH2O 洗涤培养板3 次,并晾干,储藏在2-8℃备用。
5. 用PBST 洗涤3 次,每孔加入150 μl 1% BSA 37℃封闭1 小时。
6. PBST 洗涤3 次后,每孔加入100 μl 不同倍比稀释度的血清,并加入对照样品,37℃孵育2 小时。
7. PBST 洗涤5 次后,加入100 μl 稀释后的HRP 标记的二抗,37℃孵育1 小时。
8. PBST 洗涤5 次后,显色剂显色20 min 后,酶标仪上读取A405 吸收值。50mM 的碳酸盐包被缓冲液:0.05mol/L pH9.6 碳酸缓冲液,4℃,保存,Na2CO3 0.15 克, NaHCO3 0.293 克,蒸馏水稀释至100 ml。
ABTS 作为底物进行显色反应(10ml):
0.2M Na2HPO4 2.4ml
0.1M 柠檬酸2.6ml
ddH2O 5ml
ABTS 5mg
H2O2(30%) 4 ul(用前加入)