免疫电镜标记

         该项技术是组织样品经低温脱水渗透LR White树脂低温聚合包埋，超薄切片70-80nm，用特异性一抗与待检测抗原结合然后用带有胶体金标记的二抗与一抗抗原复合物结合，在电子显微镜下观察，由于二抗上的胶体金形成一定的电子密度而精确指示出相应抗原在亚细胞水平上的定位。

样本准备：

       组织取下后立即投入免疫电镜专用固定液，4°保存，4°冰袋运输，在保存和运输过程中固定液切勿冷冻结冰。样品固定后应尽快安排做后续包埋和免疫标记实验，减少抗原丢失的可能性。

注意事项：

1、1-3min内取样，取样组织1mm³大小。取材前可提前准备装有免疫电镜固定液A液的培养皿，将小组织块离体取下后立即投入培养皿内，用手术刀在培养皿的固定液中进行切割成1mm³的小组织块。再将切割好的小组织块转移至装有新的免疫电镜固定液的EP管内继续固定。

2、取材时尽量精确到需要观察的目的部位（如观察肾小球取肾皮质；观察胰岛取胰岛丰富的胰尾；皮肤，肠胃等在固定液中易打卷的组织可将组织粘在滤纸上进行固定）。

3、取材时一定注意避免镊子挤压等机械损伤，刀片要锋利避免挫伤组织。

实验步骤：

   免疫标记：

①复温水合：镍网从4℃取出用超纯水悬浮5min；

②清洗：TBS室温清洗3次，每次5min；

③封闭：1%BSA/TBS的封闭液室温封闭30min；

④加一抗：抗体与封闭液按一定稀释比稀释后4℃过夜孵育；

⑤清洗：室温复温后，TBS清洗3次，每次5min；

⑥加二抗：二抗与二抗稀释液按一定稀释比稀释，先室温孵育20min，后转37℃烘箱孵育1h，然后转室温复温0.5h。实验过程中防止干片。

⑦清洗：TBS清洗5次，每次5min后，超纯水清洗5次，每次5min。

⑧铀复染：镍网于2%醋酸铀饱和酒精溶液避光染色8min；70%酒精清洗3次；超纯水清洗3次。

⑨烘干：清洗后的镍网用滤纸吸干后放入网板中，37℃烘箱放置10min烘干备用。

效果展示：