原位杂交（FISH、FISH、IF三染）

　　原位杂交与免疫荧光原理：原位杂交是指将特定标记的已知顺序核酸为探针与细胞或组织切片中核酸进行杂交，从而对特定核酸顺序进行精确定量定位的过程。原位杂交可以在细胞标本或组织标本上进行。免疫荧光就是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体或抗原上，与其相应的抗原或抗体结合后，在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。

　　通过原位杂交双探针及免疫荧光进行三标，可以在组织细胞中对核酸分子和蛋白指标同时进行共定位、以及定性分析，可以用来从共定位角度提示核酸和蛋白存在相互作用。

实验结果展示：

实验流程：

　　石蜡切片荧光探针原位杂交双探针与免疫荧光三染实验步骤

　　1. 组织固定、脱水、切片、石蜡切片脱蜡至水;

　　2. 消化：切片于修复液中煮沸10-15分钟，滴加蛋白酶K消化;

　　3. 预杂交：滴加预杂交液，37°C孵育1h。

　　4. 杂交：倾去预杂交液，滴加含探针probe1+probe2 杂交液, 浓度 ，恒温箱 度杂交过夜。

　　5. 杂交后洗涤：SSC洗涤;

　　6. 孵育一抗、二抗：滴加一抗，4℃过夜，后PBS洗3×5min;滴加相应二抗，室温孵育50min，PBS洗3×5min;

　　7. DAPI复染核：切片滴加DAPI染液，避光孵育8min;

　　8. 镜检拍照;

送样运输要求：

　　冰切。标本放原位杂交固定液中，常温运输;冰冻切片-20°运输。

　　石蜡。标本放原位杂交固定液中，常温运输;石蜡切片常温运输。

　　细胞爬片。细胞爬片加原位杂交固定液固定15min后，密封，4度运输。共聚焦皿

　　新鲜组织：组织取出后可以立即冷冻处理，后干冰运输到武汉进行后续冰冻切片处理。新鲜组织-80°保存