免疫荧光（双标，组织芯片）

　　组织芯片免疫荧光染色,是将许多不同处理的组织以规则的微阵列方式排列于同一载体上，同时进行相同指标的免疫荧光检测。

实验结果展示：

细胞芯片IF染色双标-a-SMA(红)+LC3(绿)

实验流程：

　　1、石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ15min-二甲苯Ⅱ15min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-85%酒精5min-75%酒精5min-蒸馏水洗。

　　2、抗原修复：组织切片置于盛满EDTA抗原修复缓冲液(PH9.0)的修复盒中于微波炉内进行抗原修复。中火至沸后断电间隔10min中低火至沸，此过程中应防止缓冲液过度蒸发，切勿干片。自然冷却后将玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。(修复液和修复条件根据组织来确定)

　　3、加一抗：轻轻甩掉封闭液，在切片上滴加PBS按一定比例配好的一抗，切片平放于湿盒内4°C孵育过夜。(湿盒内加少量水防止抗体蒸发)

　　4、加二抗：玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加与一抗相应种属的二抗覆盖组织，避光室温孵育50min。

　　5、DAPI复染细胞核：玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加DAPI染液，避光室温孵育10min。

　　6、封片：玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后用抗荧光淬灭封片剂封片。

　　7、镜检拍照：切片于尼康倒置荧光显微镜下观察并采集图像。

送样运输要求：

　　1.组织样本放置于20倍样本体积的固定液中固定24h以上，常温运输送样。

　　3.石蜡切片常温保存运输。