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TUNEL染色检测细胞增殖
来源:德尔夫生物 发布时间:2021-06-22
细胞在发生凋亡时,会激活一些DNA内切酶,这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测,可以发现180~200bp的DNA ladder。基因组DNA断裂时,会暴露的3'-OH末端。
荧光法:暴露的3'-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT) 的催化下加上荧光素标记的dUTP,从而可以通过荧光显微镜或流式细胞仪进行检测;
DAB法:暴露的3'-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT) 的催化下加上生物素标记的dUTP,随后和辣根过氧化物酶(HRP)标记的链霉亲和素结合,随后在HRP的催化下通过DAB显色来检测细胞凋亡的情况。
TUNEL检测通常被应用于临床诊疗与科学研究,临床诊疗像肿瘤的放化疗,是通过TUNEL法检测细胞凋亡情况从而判断病人的治疗情况;而科学研究像药物研发是从促进或抑制细胞凋亡的效果来判断有没有临床治疗效果。
TUNEL染色过程中注意以下几点:
1、洗涤蛋白酶K时,一定要PBS冲洗3次,如果冲洗不净会严重干扰后续的标记反应;
2、3%的过氧化氢溶液孵育时间不应过长,否则会出现过氧化氢导致的DNA断裂,产生假阳性;
3、滴加TUNEL检测液时,可利用防蒸发膜防止其蒸发影响样本的生物素标记;、
4、配制好的DAB显色液必须一次性使用完毕,不宜冻存。